在生物学研究与猪相关疾病的检测中,猪免疫球蛋白 G(IgG)的定量检测至关重要。猪免疫球蛋白 G(IgG)试剂盒(ELISA)为此提供了精准的检测方案。
实验原理
试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)。在预包被抗猪 IgG 抗体(固相抗体)的微孔酶标板中加入校准品和待测样本,再加入 HRP 标记的抗猪 IgG 抗体(酶标抗体)。温育和充分洗涤后,形成固相抗体 - 抗原 - 酶标抗体的夹心复合物。加入底物 A 和 B,在 HRP 催化下产生蓝色产物,经终止液(2M 硫酸)作用转化为黄色。通过酶标仪在 450nm 波长测定吸光度(OD 值),其与待测样品中猪 IgG 浓度正相关,进而拟合校准品曲线,计算样本中猪 IgG 浓度。
试剂盒限制性
- 仅供科研使用,严禁用于临床诊断。
- 必须在试剂盒标示的有效期内使用,过期产品不可使用。
- 不能与其他厂家的试剂盒或者组分混用。
- 需使用试剂盒配套的样品稀释液。
- 若样本值高于最高标准品浓度值,应将样本适当稀释后重新测定。
- 待测样本中存在的人抗鼠等异嗜抗体会干扰检测结果,检测前需排除该因素。
- 通过其他方法得到的检测结果,与本试剂盒测定结果不具有直接可比性。
技术提示
1、混合蛋白溶液时,避免起泡。
2、加校准品与样本时,每个校准品浓度和样本都要更换移液枪头,公共组分应该悬臂加样,避免交叉污染。
3、合适的温育时间,和充分的洗涤步骤,是保证实验结果准确性的必要条件。
4、使用自动洗板机时,加入一个 30 秒浸泡的步骤,可以提高检测精度。
5、底物溶液为无色液体,保存过程中变为蓝色,代表底物溶液已经失效,不得使用。
6、终止液加样顺序与底物溶液加样顺序一致,加入终止液后,蓝色底物产物,会瞬间变为黄色。
7、实验中,用剩的板条,应立即放回自封袋中,密封(低温干燥)保存。
8、所有液体组分,使用前充分摇匀,严格按照说明书标明的时间、加样量及加样顺序进行温育操作。