在科研领域，准确测定小鼠体内雌三醇（E3）含量对于深入了解生理和病理机制至关重要。小鼠雌三醇（E3）定量检测试剂盒（ELISA）专为科研人员提供了一种可靠的检测手段，可用于定量检测血清、血浆、细胞培养上清液及组织中的小鼠雌三醇（E3）含量。
实验原理与特点
本试剂盒采用竞争 ELISA 法。预先包被雌三醇（E3）抗体的微孔板，依次加入样本 / 校准品和 Asaay Diluent，温育洗涤后，加入 SA - HRP 再次温育。经洗涤后加入底物 TMB 显色，室温显色后用终止液终止反应，读取 OD 值。值得注意的是，OD 值高低与样品中的雌三醇（E3）呈负相关。该试剂盒具有灵敏度高、特异性强、重复性好、操作简单、快速等优点，能可靠地检测出血清中雌三醇（E3）的变化。
试剂盒使用限制
使用本试剂盒时，需严格遵循以下限制：仅用于科研，严禁临床诊断；在有效期内使用，过期产品切勿使用；不能与其他厂家的试剂盒或组分混用；若样品需稀释，可用 PBS（PH7.4）；样本值高于最高标准品浓度时，需适当稀释后重新测定；检测前需排除待测样本中可能干扰结果的异嗜抗体；通过其他方法得到的检测结果与本试剂盒测定结果不具直接可比性。
技术操作要点
为确保实验顺利进行，需留意诸多技术要点。混合蛋白溶液时避免起泡；加校准品与样本要更换移液枪头，公共组分悬臂加样防交叉污染；保证合适的温育时间和充分的洗涤步骤；使用自动洗板机时增加 30 秒浸泡步骤可提高精度；底物溶液变蓝则失效；终止液加样顺序与底物一致，加入后蓝色底物产物变黄；用剩板条立即放回自封袋密封低温干燥保存；所有液体组分使用前充分摇匀，严格按说明书操作。
试剂盒组分与保存
试剂盒包含多种组分，校准品为抗原配制的 6 个浓度标准品（0.5ml / 管 * 6 管，浓度依次为 1400、700、350、175、87.5、0pg/mL），还有预包被固相抗体的包被微孔板（96T/48T）、HRP 标记的 SA - HRP（12mL）、用于分离 E3 与结合蛋白的 Asaay Diluent（12mL）、TMB 工作液（12mL）、2mol/L 稀释液的终止液（12mL）、含 0.15% Tween20 的 20× 浓缩洗涤液（30mL），以及说明书、自封袋、不干胶等。未开封的试剂盒需保存在 2 - 8℃，过期禁用。
生物安全注意事项
生物安全至关重要。检测需符合实验室管理规范，防止交叉污染，所有样品、洗弃液和废弃物按传染物处置。试剂盒液体组分含 proclin - 300 防腐剂，可能致皮肤过敏，避免吸入烟雾与皮肤接触；底物液对皮肤、眼睛和上呼吸道有刺激，同样要避免吸入烟雾；实验时应戴防护手套，完成后彻底洗手。
样品采集与储存
不同样本采集方法各异。细胞培养上清需在 4000rpm 离心 20min，去除细胞颗粒和聚合物，上清液保存在 20℃以下，避免反复冻融；血清采集要用不含热原和内毒素的试管，避免细胞刺激，4000rpm 离心 20min 后分离血清，保存在 - 20℃以下，避免反复冻融；血浆采集用肝素、EDTA 或柠檬酸钠抗凝，4000rpm 离心 20min 取上清，保存在 - 20℃以下，避免反复冻融；组织需用预冷 PBS 冲洗、剪碎，与对应体积 PBS 混合研磨，可超声破碎或反复冻融，5000×g 离心 5 - 10 分钟取上清检测。样本在 2 - 8℃可储存 72h，或在 - 20℃储存 6 个月，收集后若未一次检测完，需按一次用量分装冻存，避免反复冻融，使用时室温解冻并确保均匀充分。
检验方法与操作程序
检验操作需严格按步骤进行。先将试剂移至室温平衡两小时，按 1：20 用蒸馏水稀释浓缩洗涤液备用。取出预包被板，设空白对照孔，校准品每浓度设 2 孔，每孔加 15μl，检测孔加 15μl 待测血清或质控品。除空白孔外，各孔加 100μl Asaay Diluent，混匀后 37℃温育 60 分钟。洗板可选择手工（弃液、注满洗涤液静置 10 秒甩干，重复 3 次后拍干）或洗板机（选择洗涤 3 次程序洗板后拍干）。之后每孔加 100μl SA - HRP（空白对照孔除外），混匀后 37℃温育 30 分钟，再次洗板。每孔加 100μl TMB，37℃避光显色 15 分钟后加 100μl 终止液，用酶标仪在 450nm 波长下，以空白对照孔调零，测定各孔 OD 值。
结果计算与性能指标
检测完成后，以标准品浓度为纵坐标，吸光度（OD 值）为横坐标，利用计算机软件采用四参数 Logistic 曲线拟合（4 - pl）创建标准曲线方程，通过样本吸光度计算浓度值。若样品被稀释，所得浓度值需乘以稀释倍数得到最终浓度。
试剂盒性能指标良好。物理性能上，液体组分应澄清无沉淀，各组分无包装破损且装量达标；剂量反应曲线线性方面，四参数 Logistic 曲线拟合相关系数（r）绝对值不低于 0.9900；精密度上，批内、批间变异系数 CV% 均小于 15%；灵敏度高，最低检出限不高于 1.0pg/mL；回收率在 85% - 115% 之间；稳定性好，2℃ - 8℃保存有效期 6 个月；检测范围为 87.5 pg/mL – 1400 pg/mL。
小鼠雌三醇（E3）ELISA 试剂盒凭借其科学的原理、严格的操作规范和可靠的性能，为科研工作者在小鼠雌三醇研究中提供了有力支持。